Novus사는 적당한 control에서 실험 가능한 antibody를 사용하기를 권장합니다. 상품의 datasheet에 positive control tissues, cell lines, extract가 표기 되어 있습니다. 그러나 표기 되어 있지 않다면, Swiss-Prot, NCBI, GeneCards, ATCC에서 알려진 positive control을 확인해야 합니다.

HIF protein 는 degrading protein으로서 cellular re-oxygenation 일어나자마자 1 분 이내에 완전히 degradation 됩니다. 그러므로 실험에 있어서 시간이 가장 중요하며, ice cold buffer에서 cell 를 다루어야 하고, ice에서 protein prep을 진행해야 합니다. 안정화된 HIF-1은 핵으로 translocation 되므로 nuclear extract에서 최상의 결과를 얻을 수 있습니다. 반면 total cell extract에서 HIF-1 확인은 가능하지만 지저분 할 뿐만 아니라 염색이 약하게 나타날 수 있습니다. Unprocessed HIF-1는 ~95 kDa 이지만 전체 post-translationally modified form은 ~116 kDa입니다.

종들의 교차반응성 (cross-reactivity)는 datasheet에서 확인할 수 있습니다. 하지만 실험되지 않은 종에서 항체를 사용하기 원한다면 protein과 immunogen사이의 sequence alignment를 확인해야 합니다. sequence alignment는 Swiss-Prot 또는 ClustalW에서 온라인 database에서 검색하면 됩니다. Alignment score가 85%이면 좋은 조건이며 종들간에 교차반응할 수 있습니다. Novus사는 datasheet에 표기된 종들에 대해서 항체를 실험 하기를 권장합니다.

Novus사 제품의 농도는 제품과 함께 받으신 상품 안의 datasheet에 기재되어 있습니다. 또한 온라인 상의 datasheet에서도 확인할 수 있습니다.

보존액은 안정한 상태로 사용기한을 늘리기 위해 사용하지만 이와 상관없이Novus사의 모든 항체는 받은 날짜로부터 6개월 동안 품질이 보장됩니다. 보존액에 사용되는 Sodium azide는 박테리아 성장을 억제할 뿐 항체의 특이성 (specificity)에는 영향을 끼치지 않습니다.

Novus사는 항체에 대한 재사용을 권장하지 않습니다.

Novus는 표기된 datasheet 에 기재된 방식대로 저장해야 합니다. 부적절한 저장은 항체의 활성을 떨어뜨리며, 이 경우 결과에 대한 책임을 지지 않습니다. 항체는 반복적인 냉동/해동보다 4 °C 보관을 권장합니다.

Novus사는 free sample을 제공하지 않습니다. 하지만 몇몇의 상품은 저렴한 가격으로 sample size를 제공 받을 수 있습니다.

Novus사에서는 Western blot 실험 시 3 % BSA 또는 5 % NFDM (Non-fat Dry Milk)를 사용합니다. 그러나 Phosphoprotein과 관련된 실험을 할 경우에는 BSA (in TBST)로 blocking 합니다. 반면, Milk는casein (phosphoprotein) 을 포함하고 있어 검출시 높은 background 원인이 됩니다.

일반적으로 단백질은 PAGE gel matrix 통해 이동하면서 각각의 분자량에 따라 분리됩니다. 분자량이 작은 단백질은 gel을 통과할 때 더 빨리 이동하지만, 전사 후 변형 (post-translational modification), 번역 후 절단 (post-translational cleavage, splice variation), 전자 변형 (charge variation) 등 많은 factor에 의해 영향을 받기 때문에 실제 band size와 예상된 size가 달라질 수 있습니다.